内蒙环境监测机构分析到紫外线消毒效果验证的目的是验证紫外线对物体表面的消毒效果，并将其作为传、洁净室等场所消毒灭菌的辅助手段。

　　紫外线消毒效果验证：准备工作。

　　1.仪器设备：

　　医用超净台、电热恒温培养箱、霉菌培养箱。

　　2.器材：

　　灭菌刻度吸管(1ml，10m1)、灭菌试管、灭菌平皿、酒精灯、载体(1.0×1.0cm玻片)

　　3.材料及试剂：

　　纯化水、营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、金黄色葡萄球菌、稀释剂(0.9%氯化钠溶液)

　　紫外线消毒效果验证：验证工作。

　　1.试验环境。

　　试验在洁净度1万级以下局部洁净度100级的单向流空气区进行，全过程严格遵守无菌操作。单向流空气区。工作台面和环境定期按照《医药工业洁净室（区）悬浮颗粒试验方法》现行国家标准进行清洁度验证。浮游菌和沉降菌。

　　每次操作开始前，打开紫外线照射1小时。

　　2.培养基的制备。

　　营养琼脂培养基：

　　根据需要，将营养琼脂培养基粉放入合适的容器中，按配方比例加入纯化水，水浴加热溶解，将pH值调整至7.1±0.2，放入合适的容器中，高压灭菌器灭菌121℃×15分钟。

　　营养肉汤培养基：

　　称营养肉汤培养基20克，加入1000毫升纯化水，加热溶解，加热至沸腾，冷却至常温，分装在合适的容器中，高压灭菌器灭菌121℃×15分钟。

　　3.确定细菌及其孢子和真菌的杀灭作用。

　　制备菌液，将灭菌载体平放在灭菌平皿中进行验证，通过阳性对比计算结果。

　　合格标准：空白对照应无菌生长；指示菌杀灭率≥99.9%判定为消毒合格。

　　紫外线消毒效果验证：验证方法。

　　1.测量辐照强度。

　　1)打开紫外线5min后，用中心波长为253.7nm的紫外线强度测量仪在灯管下垂直1m的中心测量辐照值(uW/cm2)。

　　2)测量时，电压应稳定在220V。

　　3)普通或低臭氧直管紫外线灯(30W)，在灯管下垂直1m的中心，新灯管。

　　辐照值应≥90uW/cm2。使用中灯管的辐照值应≥70uW/cm2，低于此值者应更换。

　　2.照射剂量。

　　表面消毒接受的照射剂量应满足杀灭目标微生物的要求。对于大肠杆菌，照射剂量应达到7.5×103uW·s/cm2，对于金黄色葡萄球、白色念珠菌和枯草芽孢杆菌，应达到2.53×104uW·s/cm2。

　　照射剂量计算:照射剂量(uWs/cm2)=紫外灯管强度(uW/cm2)×时间(s)

　　3.确定细菌及其孢子和真菌的杀灭作用。

　　制备菌液:金黄色葡萄球菌新鲜培养物、大肠杆菌新鲜培养物、枯草芽孢杆菌新鲜培养物。

　　新鲜的白色念珠菌培养物。

　　杀灭效果测定：

　　1)将灭菌载体平放在灭菌容器中，每个载体滴注定量细菌悬浮液，均匀涂抹，放入37℃培养箱干燥。打开紫外线5分钟后，将16个染色玻片平放在灭菌容器中，水平放在适当的距离照射中，在4个不同的间隔时间(15分钟.30分钟.45分钟.60分钟)取出4个染色玻片，分别放入4个5分钟洗脱液试管中，振动80次。

　　2)适当稀释后，取1ml洗脱液，倒入平板，每个染色玻片接种两个，细菌30~35℃培养48小时，真菌23~28℃培养72小时。

　　阳性对照，除不进行照射处理外，取4个染色玻片，分别放入4个5ml洗脱液试管中，振动80次。其余的按1)操作。

　　最后，根据标准(指示菌杀灭率≥99.9%判定为消毒合格)，记录验证结果。

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